ICS 11.220 DB31 CCS B 41 上海市地方标准 DB31/T 955--2022 代替DB31/T955—2015 猪圆环病毒3型实时荧光PCR检测方法 Real-time PCR method for detection of porcine circovirus type 3 地方标准信息服务平台 2022-11-09发布 2023-02-01实施 上海市市场监督管理局 发布 中国标准出版社 出版 地方标准信息服务平台 DB31/T 955—2022 目 次 前言 1 范围 2 规范性引用文件 3 术语和定义 4 原理 5 仪器设备 6 耗材 7 试剂 8 样品采集与处理 9 DNA提取 10实时荧光PCR检测 附录A（规范性） 溶液配制 附录B（规范性） 引物和探针 附录C（规范性） DNA提取方法 附录D（规范性） 荧光PCR反应体系 地方标准信息服务平台 地方标准信息服务平台 DB31/T955—2022 前言 本文件按照GB/T1.1-一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件代替DB31/T955一2015《猪圆环病毒2a/2b亚型实时荧光PCR检测和分型方法》，与 DB31/T955一2015相比，除编辑性改动外，主要技术变化如下： 一更改“缩略语”为“术语和定义”（见第3章，2015年版的第3章）； 一增加了耗材（见第6章）； 更改了试剂（见第7章，2015年版的第6章）； 增加了粪便样品采集方法（见第8章）； 删除了注意事项（见2015年版的第9章）； 更改了附录A（见附录A，2015年版的第6章）； 增加了引物和探针（见附录B) 更改了DNA提取方法（见附录C，2015年版的附录A）； 增加了荧光PCR反应体系（见附录D)。 本文件由上海市农业农村委员会提出并组织实施。 本文件由上海市畜牧业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：上海市动物疫病预防控制中心。 本文件主要起草人：刘健、杨德全、葛菲菲、李鑫、白艺兰、沈海、赵洪进、王建、杨显超、周锦萍、 鞠厚斌、李凯航、卢军、葛杰、桂亚萍。 本文件所代替文件的历次版本发布情况为： 方标准信息服务平台 -DB31/T 955—2015。 I 地方标准信息服务平台 DB31/T 955--2022 猪圆环病毒3型实时荧光PCR检测方法 1范围 本文件规定了猪圆环病毒3型实时荧光PCR检测方法的仪器设备、耗材、试剂、样品采集与处理、 DNA提取和实时荧光PCR检测等技术要求。 本文件适用于猪圆环病毒3型核酸检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 猪圆环病毒 3 型 porcine circovirus type 3;PCV3 属于圆环病毒科圆环病毒属新发猪病毒性传染病病原，表现为猪皮炎与肾病综合征的临床病症。 3.2 开放阅读框 open reading frame;ORF 从起始密码子开始，是DNA序列中具有编码蛋白质潜能的序列，结束于终止密码子连续的碱基 序列。 3.3 循环数阈值 cycle threshold value Ct 值 每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环数。 4原理 根据PCV3ORF1序列，设计相应的引物和探针，建立实时荧光PCR检测方法， 5仪器设备 5.1荧光PCR 仪。 5.2研钵或组织研磨器。 5.3干热火菌器。 5.4高速台式冷冻离心机：可控温至4℃，离心力可达12000r/min以上。 1