ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 541—2016 代替NY/T541—2002 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 Technical specifications for collection,storage and transportation of veterinarydiagnostic specimens 行业标准信息服务平台 2016-10-26发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部 S发布 NY/T541—2016 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替NY/T541—2002《动物疫病实验室检验采样方法》。与NY/T541—2002相比，除编 辑性修改外，主要技术变化如下： 补充了该标准相关的规范性引用文件； 补充了动物疫病实验室检验样品、采样、抽样单元、随机抽样等术语和定义； 一对样品采样的基本原则进行了梳理归类，细化和完善了采样的基本原则； 补充了原标准NY/T541一2002未涵盖实验室检测样品（环境和饲料样品、脱纤血样品、扁桃 体、牛羊O-P液、肠道组织样品、鼻液、睡液等）的采集规定，补充细化了常见畜禽的采血方法 克服了部分标题用词不准确和规定相对笼统的问题； 细化和完善了样品的包装、保存和运送环节，增强了标准的可操作性、实用性。 本标准由农业部兽医局提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。 本标准起草单位：中国动物卫生与流行病学中心、青岛农业大学。 本标准主要起草人：曲志娜、刘焕奇、孙淑芳、赵思俊、姜雯、王娟、曹旭敏、宋时萍。 本标准的历次版本发布情况为： NY/T541—2002。 行业标准信息服务平台 I NY/T541—2016 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 1范围 本标准规定了兽医诊断用样品的采集、保存与运输的技术规范和要求，包括采样基本原则、采样前 准备、样品采集与处理方法、样品保存包装与废弃物处理采样记录和样品运输等。 本标准适用于兽医诊断、疫情监测、畜禽疫病防控和免疫效果评估及卫生认证等动物疫病实验室样 品的采集、保存和运输。 2 规范性引用文件 下列文件对于 可少的 凡是注日 仅注日期的版本适用于本文 用本 件。凡是不注日 期的可 用文 本（包括所有的修 件 GB16548 病 口病害动 产品生物安全处理规 GB/T 6550 2608 新城疫诊断技术 608 猪瘟诊断技术 GB/T 655 口蹄疫诊断技术 GB/T 189 GB/T 高致病性禽流感诊断技术 18 36 003 NY/T 动物炭痘诊断技术 中华人民 共和国 国务院令第424号 病原微生 物实验室生物安全管理 中华人民 共和国 部公告第302号 中华人民 共和国 种或春 智样本运输包装规范 原微 者 3 术语和定义 下列术语和定 3. 1 样品 specimen 取自动物或环境·拟通过验验 力物个体、群体或环境有关状 交物品。 3. 2 采样 sample 按照规定的程序和要求， ，从动物或环境取得 定量的样本 圣过适当的处理，留做待检样品的 过程。 服务平台 3. 3 抽样单元 samplingunit 同一饲养地、同一饲养条件下的畜禽个体或群体。 3. 4 随机抽样 random sampling 按照随机化的原则（总体中每一个观察单位都有同等的机会被选人到样本中），从总体中抽取部分 观察单位的过程。 3.5 灭菌 sterilization 1 NY/T541—2016 应用物理或化学方法杀灭物体上所有病原微生物、非病原微生物和芽孢的方法。 4采样原则 4.1先排除后采样 凡发现急性死亡的动物，怀疑患有炭疽时，不得解剖。应先按NY/T561一2015中2.1.2的规定 采集血样，进行血液抹片镜检。确定不是炭疽后，方可解剖采样。 4.2合理选择采样方法 4.2.1应根据采样的目的、内容和要求合理选择样品采集的种类、数量、部位与抽样方法。样品数量应 满足流行病学调查和生物统计学的要求。 4.2.2诊断或被动监测时，应选择症状典型或病变明显或有患病征兆的畜禽、疑似污染物；在无法确定 病因时，采样种类应尽量全面。 4.2.3主动监测时，应根据畜禽日龄、季节、周边疫情情况估计其流行率，确定抽样单元。在抽样单元 内，应遵循随机取样原则。 4.3采样时限 采集死亡动物的病料，应于动物死亡后2h内采集。无法完成时，夏天不得超过6h，冬天不得超过 24h。 4.4无菌操作 采样过程应注意无菌操作，刀、剪、镊子、器血、注射器、针头等采样用具应事先严格灭菌，每种样品 应单独采集。 4.5尽量减少应激和损害 活体动物采样时，应避免过度刺激或损害动物；也应避免对采样者造成危害 4.6生物安全防护 采样人员应加强个人防护，严格遵守生物安全操作的相关规定，严防人兽共患病感染；同时，应做好 环境消毒以及动物或组织的无害化处理，避免污染环境，防止疫病传播。 5采样前准备 5.1采样人员 采样人员应熟悉动物防疫的有关法律规定，具有一定的专业技术知识，熟练掌握采样工作程序和采 样操作技术。采样前，应做好个人安全防护准备（穿戴手套、口罩、一次性防护服、鞋套等，必要时戴护目 镜或面罩）。 5.2采样工具和器械 5.2.1应根据所采集样品种类和数量的需要，选择不同的采样工具器械及容器等，并进行适量包装。 5.2.2取样工具和盛样器具应洁净、干燥，且应做灭菌处理： a）刀、剪、镊子、穿刺针等用具应经高压蒸汽（103.43kPa)或煮沸灭菌30min临用时用75%酒精 擦拭或进行火焰灭菌处理； b）器皿（玻制、陶制等）应经高压蒸汽（103.43kPa)30min或经160℃干烤2h灭菌：或置于1%~ 2%碳酸氢钠水溶液中煮沸10min15min后，再用无菌纱布擦干，无菌保存备用； c）注射器和针头应放于清洁水中煮沸30min，无菌保存备用；也可使用一次性针头和注射器。 5.3保存液 应根据所采样品的种类和要求，准备不同类型并分装成适量的保存液，如PBS缓冲液、30%甘油磷 酸盐缓冲液、灭菌肉汤（pH7.2~7.4)和运输培养基等 2 NY/T541—2016 6样品采集与处理 6.1血样 6.1.1采血部位 6.1.1.1应根据动物种类确定采血部位。对大型哺乳动物，可选择颈静脉、耳静脉或尾静脉采血，也可 用肱静脉或乳房静脉；毛皮动物，少量采血可穿刺耳尖或耳壳外侧静脉，多量采血可在隐静脉采集，也可 用尖刀划破趾垫0.5cm深或剪断尾尖部采血；啮齿类动物，可从尾尖采血，也可由眼窝内的血管丛 采血。 6.1.1.2猪可前腔静脉或耳静脉采血；羊常采用颈静脉或前后肢皮下静脉采血；犬可选择前肢隐静脉 6.1.2采血方法 螺旋式脱碘消毒，干燥后穿刺采血。采血可用采血器或真空采血管（不适合小静脉，适用于大静脉）。少 量的血可用三棱针穿刺采集，将血液滴到开口的试管内。 6.1.2.1猪耳缘静脉采血 按压使猪耳静脉血管怒张，采样针头斜面朝上、呈15°角沿耳缘静脉由远心端向近心端刺入血管，见 有血液回流后放松按压，缓慢抽取血液或接入真空采血管。 6.1.2.2猪前腔静脉采血 6.1.2.2.1站立保定采血 将猪的头颈向斜上方拉至与水平面呈30°以上角度，偏向一侧。选择颈部最低凹处，使针头偏向气 管约15°方向进针，见有血液回流时，即把针芯向外拉使血液流入采血器或接人真空采血管。 6.1.2.2.2仰卧保定采血 将猪前肢向后方拉直，针头穿刺部位在胸骨端与耳基部连线上胸骨端旁2cm的凹陷处，向后内方与地 面呈60°角刺入2cm~3cm，见有血液回流时，即把针芯向外拉使血液流人采血器或接人真空采血管。 6.1.2.3牛尾静脉采血 将牛尾上提，在离尾根10cm左右中点凹陷处，将采血器针头垂直刺入约1cm，见有血液回流时，即 可把针芯向外拉使血液流入采血器或接入真空采血管。 6.1.2.4牛、羊、马颈静脉采血元 在采血部位下方压迫颈静脉血管使之怒张，针头与皮肤呈45°角由下向上方刺入血管，见有血液回 流时，即可把针芯向外拉使血液流人采血器或接人真空采血管。 6.1.2.5禽翅静脉采血 压迫翅静脉近心端，使血管怒张，针头平行刺入静脉放松对近心端的按压，缓慢抽取血液；或用针 头刺破消毒过的翅静脉，将血液滴到直径为3mm～4mm的塑料管内，将一端封口。 6.1.2.6禽心脏采血 6.1.2.6.1维禽心脏采血 针头平行颈椎从胸腔前口插入，见有血液回流时，即把针芯向外拉使血液流入采血器 6.1.2.6.2成年禽心脏采血 右侧卧保定时，在触及心搏动明显处，或胸骨脊前端至背部下凹处连线的1/2处，垂直或稍向前方 刺入2cm~3cm，见有血液回流即可采集 仰卧保定时，胸骨朝上，压迫嗪囊，露出胸前口，将针头沿其锁骨俯角刺入，顺着体中线方向水平刺 入心脏，见有血液回流即可采集。 3 NY/T541—2016 6.1.2.7犬猫前臂头静脉采血 压迫犬猫肘部使前臂头静脉怒张，绷紧头静脉两侧皮肤，采样针头斜面朝上、呈15°角由远心端向近 心端刺入静脉血管，见有血液回流时，缓慢抽取血液或接人真空采血管。 6.1.3血样的处理 6.1.3.1全血样品 样品容器中应加0.1%肝素钠、阿氏液（见A.1，2份阿氏液可抗1份血液）、3.8%~4%枸橡酸钠 (O.1mL可抗1mL血液）或乙二胺四乙酸（EDTA，PCR检测血样的首选抗凝剂）等抗凝剂，采血后充分 混合。 6.1.3.2脱纤血样品 应将血液置人装有玻璃珠的容器内·反复振荡 方止红细胞破裂。 待纤维蛋白凝固后，即可制 成脱纤血样品，封存后以冷藏状态立 6.1.3.