ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2692—2015 奶牛隐性乳房炎快速诊断技术 Rapid diagnostic techniques for subclinical mastitis in dairy cow 行业标准信息服务平台 2015-02-09发布 2015-05-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T26922015 前言 本标准按照GB/T1.1-—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由中国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。 本标准起草单位：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所。 本标准主要起草人：李新圃、罗金印、李宏胜、杨峰、李建喜、杨志强。 行业标准信息服务平台 NY/T2692—2015 奶牛隐性乳房炎快速诊断技术 1范围 本标准规定了奶牛隐性乳房炎快速诊断技术。 本标准适用于奶牛场泌乳牛的隐性乳房炎现场诊断，但不包括干奶前2周和分娩后1周的泌乳牛。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 隐性乳房炎subclincialmastitis 亚临床型乳房炎（乳腺炎）。奶牛乳腺组织的一种炎症，无肉眼可见的病理变化，但乳汁理化性质已 发生明显变化。由于炎症向局部组织浸润，乳汁中的体细胞数量异常升高，高于50万个/mL。 2. 2 乳汁体细胞somaticcellsinmilk 乳汁中的体细胞主要由中性粒细胞、淋巴细胞和上皮细胞组成。健康泌乳牛乳腺中的体细胞数量 很少，发生乳房炎时，大量中性粒细胞以及淋巴细胞从血液向乳腺迁移，同时乳腺组织受损，加剧了上皮 细胞的脱落，致使乳汁中的体细胞数量异常升高。 2. 3 快速诊断技术rapiddiagnostic techniques 是一种便于现场操作及在较短时间检测出结果的技术。 3诊断原理 以阴离子表面活性剂为主要成分的诊断液与新鲜乳汁混合，破坏乳汁中的体细胞，释放出细胞核中 的DNA，遇水形成黏度很高的DNA高分子水化物。乳房炎的炎症越严重，乳汁体细胞数越多，形成的 标准信息服务平台 高黏度DNA高分子水化物也越多。 4诊断材料 4.1诊断液 4.1.1组成 十二烷基硫酸钠 180 g 直链烷基苯磺酸 50 g 硼酸 5g 溴甲酚紫 0. 4 g 氢氧化钠溶液 100 g/ L 蒸馏水加至 1 000 mL 注：组成成分应使用化学纯试剂，当没有试剂级别时，可以使用高纯度的化工原料。 4.1.2制备 按组成配比，将十二烷基硫酸钠、直链烷基苯磺酸、硼酸、溴甲酚紫溶解在500mL蒸馏水中，用100 1 NY/T 2692—2015 4.2诊断盘 为白色或乳白色聚氯乙烯（PVC)塑料材质，由1个手柄和4个检验杯组成。杯和杯之间留有10 mm左右的间隙，每个检验杯的高度在15mm左右，内径在70mm左右，用于采集乳样、混合乳样和诊 断液、观察诊断结果。测试后，用常水冲洗干净，以便继续使用。 5诊断方法 操作及判断： a）1份诊断液用4份蒸馏水或纯净水稀释备用； b）弃去泌乳牛头两把乳，将4个乳室的乳汁按一定顺序分别挤人诊断盘的4个检验杯中； c）将诊断盘倾斜60°角弃去多余乳样，使杯中保留乳汁约2mL，加人稀释诊断液2mL； d）在光线明亮处，水平同心圆旋转摇动诊断盘5s～30s，使诊断液与乳汁充分混合； e）按表1的判断标准，在60 s内判断结果。 6成品诊断液 可直接选购成品诊断液及配套诊断盘： 诊断液按产品说明书使用，判断标准应与表1相符； a)1 b）产品及质量标准参见附录A； 包装、标志和使用说明书参见附录B。 表1诊断液检测隐性乳房炎的判断标准 隐性乳房炎 体细胞数(SCC)范围 诊断液与乳汁的混合反应 诊断结果 万个/mL 阴性（一） SCC<50 旋转摇动诊断盘时，混合物呈均匀的液态；倾斜诊断盘时，底部无沉淀 旋转摇动诊断盘时，混合物中有少量稀薄沉淀物；倾斜诊断盘时，沉淀 弱阳性 (十) 50<SCC<150 物散布于底部有一定黏附性 旋转摇动诊断盘时，混合物中的沉淀物多而黏稠，有向中心聚集的倾 阳性(++) 150<SCC<500 向；倾斜诊断盘时，沉淀物黏附于底部流动慢 旋转摇动诊断盘时，混合物中的沉淀物大部分或全部呈明显胶状，向 强阳性（+++） SCC>500 标准信息服务平台 中心聚集成团；倾斜诊断盘时，沉淀物几乎完全黏附于底部难以流动 2 NY/T2692—2015 附录A （资料性附录） 诊断液的质量标准 A.1诊断液产品 LMT,BMT、HMT,CMT 等。 A.2符合率 奶牛隐性乳房炎诊断液是一种间接乳汁体细胞计数法，与NY/T800一2004规定的显微镜法和乳 汁体细胞计数仪法（包括电子粒子技术体细胞仪和荧光光电计数体细胞仪）比较，其诊断符合率应符合 表 A.1 的要求。 表A.1诊断液的符合率 体细胞数(SCC）范围 与显微镜法比较 与细胞计数仪法比较 诊断结果 万个/mL % % 乳房炎阴性（一） SCC<50 ≥90 ≥90 乳房炎弱阳性（十） 50<SCC<150 ≥80 ≥80 乳房炎阳性（+十） 150<SCC<500 ≥80 ≥80 乳房炎强阳性（十++） SCC>500 ≥80 >80 乳房炎阳性（十、十十、十十十） SCC>50 ≥90 ≥90 A.3特异性 诊断液不与正常乳汁成分发生反应，与乳汁中的体细胞反应具有特异性： a) 体细胞悬液：采集健康家免抗凝血作为体细胞悬液，其白细胞数大约在900万个/mL左右，以 白细胞计数结果为准； b) 健康乳汁：采集健康泌乳牛乳汁，其体细胞数应小于20万个/mL，以体细胞计数结果为准； 生理盐水：按常规方法配制； d）特异性试验：取等量体细胞悬液2份，同法分别用健康乳汁和生理盐水进行倍比稀释，然后同 时进行诊断液检测和直接体细胞计数，2组稀释液的诊断液检测结果与直接体细胞计数结果 应一致； e）直接体细胞计数：按照NY/T800—2004规定的方法执行。 A.4重复性 采集隐性乳房炎一、十、十十、十十十的乳样若干份，使用同一批不同包装的诊断液测定，结果应一 致；使用不同批次诊断液测定，结果也应一致。 LMT、BMT、HMT、CMT等是适合的市售产品的实例，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可，也 可使用其他等效的同类产品。 3 NY/T2692—2015 A.5稳定性 将诊断液置于密闭包装容器中，在（40士2)℃、相对湿度（75土5）%条件下放置，分别在0个月、1个 月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月取样检测，应符合A.1～A.4的要求。产品置于棕色PET高 密度聚酯瓶中密封放置，常温下可保存3年。 行业标准信息服务平台 4 NY/T2692—2015 附录B （资料性附录） 产品的包装、标志和使用说明书 B. 1 外包装上至少应有下列标志 兽用标示； a) b) 产品名称； c) 预期用途； d) 包装规格； e) 储存方法； f) 生产日期和有效期； g) 生产者名称、地址和联系方式。 B. 2 内包装上应有下列标志 a) 兽用标示； b) 产品名称； 预期用途； c) d) 储存方式； e) 注意事项； f) 生产日期和有效期； g) 生产者名称、地址和联系方式。 B. 3 使用说明书应有下列内容 业标准信息服务平台 a) 兽用标示； b) 产品名称； c) 诊断原理； 预期用途； d) 操作步骤； e) f) 判断标准； g) 注意事项； 包装规格； h) i) 储存条件； j) 生产日期和有效期； k) 生产者名称、地址和联系方式。 5