ICS DB1304 邯 郸 市 地 方 标 准 DB 1304/ T441—2023 鸡源沙门菌噬菌体微囊包被技术规程 2023 - 08 - 21发布 2023 - 08 - 30实施 邯郸市市场监督管理局 发 布 DB1304/ T441 —2023 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 －2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规则起 草。 本文件由河北工程大学提出。 本文件起草单位：河北工程大学、邯郸市产品质量监督检验所。 本文件主要起草人：张永英、钟翠红、杜越、石博文、霍敏、杨硕、王京兰、杨利、王风申、何晓 玲、石玉祥、王方方、刘辉、徐丽娜、刘冠慧、张博、谢自强、袁英、王皓婷、李丽花。 DB1304/ T441 —2023 1 鸡源沙门菌噬菌体微囊包被技术规程 1 范围 本文件规定了鸡源沙门菌噬菌体微囊包被的术语和定义、 噬菌体菌种选择、 包被材料选择及其配比、 包被方法、及微囊化噬菌体质量检测。 本文件适用于沙门菌噬菌体微囊包被。其他种类噬菌体微囊包被也可参照执行 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单 )适用于本文 件。 GB /T4789.31-2003 食品卫生学检验 沙门菌、志贺菌、致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体检 验方法 GB 13078 饲料卫生标准 GB 18596 畜禽养殖业污染物排放标准 GB/T 32148 家禽健康养殖规范 GB/T 32269-2015 纳米科技 纳米物体的术语和定义 纳米颗粒、纳米纤维和纳米片 GB/Z 39262-2020 纳米技术 纳米材料毒理学筛选方法指南 NY/T 388 畜禽场环境质量标准 DB 13/T 5583-2022 噬菌体防控奶牛乳房炎技术规程 DB1304/T 417-2022 噬菌体防控鸡源沙门菌技术规程 T/SDAA 017-2021 噬菌体筛选技术规程 3 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 微囊化噬菌体 微囊化噬菌体是利用天然或合成高分子材料将噬菌体包被，形成的微小粒子。 4 噬菌体菌种选择 4.1 沙门菌分离鉴定 参照NY/T 541 采集样品后，按照 GB 4789.4-2016 分离鉴定沙门菌。 4.2 沙门菌噬菌体分离纯化 按照DB 13/T 5583-2022 分离鉴定沙门菌噬菌体。 DB1304/ T441 —2023 2 4.3 沙门菌噬菌体菌种的细菌污染检测 按照DB 13/T 5583-2022 进行沙门菌噬菌体菌种的细菌污染状况检测。 5 包被材料选择及其配比 5.1 包被材料选择 沙门菌噬菌体的包被材料选用市销阳离子醚化淀粉、海藻酸钠、黄原胶、 CaCl2、壳聚糖、明胶， 其质量需符合相应企业生产标准。 5.2 包被材料配比 每1000ml中阳离子醚化淀粉、 海藻酸钠、 黄原胶、 CaCl2、 壳聚糖、 明胶的配比应为 24：20:5:20:4:80 。 6 包被方法 将阳离子醚化淀粉溶于去离子水， 60℃备用（ A液） ，纯化后的噬菌体悬液（ B液） ，A液和B液混 合均匀备用（ C液） 。将海藻酸钠溶于 Tris-HCl 溶液备用（ D液） ，黄原胶溶于去离子水， （ E液） ，纳米 TiO2置于去离子水中制成母液，超声处理 1 h后，适当稀释后，再超声处理 15 min，备用（ F液） ，将 C、D、E、F四液置于同一烧杯，混合均匀，去除气泡，备用（ G液） 。向2%CaCl2 溶液（H液）中以 10 mL/min 滴速距溶液 5 cm高度处滴入 G液，形成海藻酸钙，室温静置 30 min，等待微球固定，收集 噬菌体微球，置于壳寡糖溶液（ I液）中覆膜 30 min，过滤收集噬菌体微球，置于 4℃中密封保存，或 置于电热鼓风干燥箱中 30℃干燥24 h后，常温密封保存。 7 质量检测 7.1 总则 每个批次的包被产品，检测指标包括效价、包封率、酸碱稳定性、缓释性能和储存性能。 7.2 效价测定 取1 g 微囊化噬菌体，置于微球破解液（柠檬酸钠 14.7g、碳酸氢钠 16.8g，溶于1LSM缓冲液)中， 待完全溶解后， 以无菌生理盐水进行 2-3个稀释梯度， 各取等体积稀释液与宿主菌悬液混合， 静置 3 min， 迅速制成双层平板， 37℃倒置培养过夜，按照 T/SDAA 017-2021 方法计算噬菌体效价，噬菌体效价应 不低于108 PFU/g 。 7.3 包封率测定 包封率（ %）=微球中噬菌体效价 /初始投入的噬菌体量× 100%。包封率不应低于 95%。 7.4 酸、碱稳定性和缓释性能测定 将微囊化噬菌体置于模拟胃液、 肠液， 利用双层 LB培养基平板法检测游离噬菌体效价。 在 pH2.0-9.0 范围内存活不低于 30min，效价不低于 108，缓释时间不低于 4h。 测定其耐酸碱的能力和释放行为。 7.5 储存性能