(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210550471.4 (22)申请日 2022.05.18 (71)申请人 山西农业大 学 地址 030031 山西省太原市小店区龙城大 街81号 申请人 晋中市太 谷区现代农业产业发展中 心 (72)发明人 员佳乐　路畅　杨冠青　史明月　 杨帅　李文霞　孙迪　张燕伟　 牛瑾　张燕　曹果清　李步高　 (74)专利代理 机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 专利代理师 黄爽 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01)C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) (54)发明名称 与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA及 其应用 (57)摘要 本发明提供一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖 相关的circRNA及其应用。 本发明基于全转录组 测序首次发现环状RNA  circLMO7在晋汾白猪肌 肉组织中高表达， 且在其1d、 90d、 180d中表达量 显著下降， 通过PCR及Sanger测序和RNase  R消化 实验证实了cir cLMO7的客观存在； 进 一步利用实 时荧光定量PCR证实circLMO7在晋汾白猪1d、 90d、 180d中表达量持续下降； 利用EdU、 CCK ‑8及 实时荧光定量PCR试验进 一步验证了cir cLMO7在 猪骨骼肌卫星细胞增殖过程中起显著上调作用。 本发明提出circLMO7可作为生物标志物用于鉴 定猪骨骼肌卫星细胞的增殖情况。 权利要求书1页 说明书7页 序列表4页 附图5页 CN 115058419 A 2022.09.16 CN 115058419 A 1.与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA， 其特征在于， 所述circRNA为circLMO7， 其 对应的cDNA序列如SEQ  ID NO:1所示。 2.权利要求1所述circRNA作为猪骨骼肌卫星细胞增殖的标志物在制备用于鉴定猪骨 骼肌卫星细胞增殖的检测试剂或试剂盒中的应用。 3.用于检测权利要求1所述circRNA的引物， 其特征在于， 包括如SEQ  ID NO:2所示的上 游引物和如SEQ  ID NO:3所示的下游引物。 4.用于鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括用于检测 circLMO7表达水平的试剂； 其中， circLMO7的序列如SEQ  ID NO:1所示。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括SEQ  ID NO:2‑3所示引 物。 6.权利要求1所述circRNA的抑制剂， 其特征在于， 所述抑制剂为siRNA， 所述抑制剂为 SEQ ID NO:8‑9、 SEQ ID NO:10‑11或SEQ ID NO:12‑13所示的siRNA， 或者上述三对siRNA的 组合。 7.一种鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖效率的方法， 其特征在于， 所述方法包括： 检测猪骨 骼肌卫星细胞中circLMO7的相对表达水平， 若与对照组相比circLMO7的表达水平显著降 低， 则表明猪骨骼肌卫星细胞增殖效率低； 其中， circLMO7的序列如SEQ  ID NO:1所示。 8.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于， 利用SEQ  ID NO:2‑3所示引物检测 circLMO7的表达水平。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058419 A 2与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子遗传技术领域， 具体地说， 涉及一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相 关的circRNA及其应用。 背景技术 [0002]猪肉是我国最重要的肉类来源之一， 占肉类消费总量的近40％， 骨骼肌作为动物 体中占比较大的组织， 直接决定家畜的产肉性能。 骨骼肌发育是一个高度协调的过程， 主要 包括由位于中胚层的间充质干细胞增殖和分化成成肌细胞、 成肌肌细胞融合成多核肌纤维 以及肌纤维的成熟。 这些过程由肌源性基因如肌源性调节因子(MRF)和成对盒(PAX)基因的 表达严格而复杂地控制。 与 此同时， 非编码RNA(ncRNAs)， 如 microRNA(miRNA)、 长链非编码 RNA(lncRNA)和环状RNA(circRNA)， 它 们在骨骼肌生长发育中调控作用逐渐 被揭晓。 [0003]CircRNA是一种反向剪接形成的共价闭合环状RNA分子， 由于高通量RNA测序(RNA ‑ seq)的发展， 在真核生物(包括人类、 小鼠、 牛和鸡)中鉴定出数千个circRNA。 大部分 circRNA的结构非常稳定， 丰度高， 具有时空表达特异性， 这预示着circRNA可能在生物机体 基因表达调控中发挥重要作。 近几年关于circRNA在医学上作为相关疾病的诊疗靶点的研 究引起了广泛关注， 而与猪骨骼肌卫星细胞有关的circRNA研究鲜有报道。 探究在猪骨骼肌 生长发育中扮演 重要角色的新circRNA， 不仅能揭示骨骼肌卫星细胞功能的新机制， 还将提 供肌肉疾病新的诊疗 靶点。 发明内容 [0004]本发明的目的是提供一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA及其应用。 [0005]为了实现本发明目的， 第一方面， 本发明提供一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关 的circRNA， 所述circRNA为circLMO7， 其对应的cDNA序列如SEQ  ID NO:1所示。 [0006]第二方面， 本发明提供所述circRNA作为猪骨骼肌卫星细胞增 殖的标志物在制备 用于鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖的检测试剂或试剂盒中的应用。 [0007]第三方面， 本发明提供一对用于检测所述circRNA的引物， 包括如SEQ  ID NO:2所 示的上游引物和如SEQ  ID NO:3所示的下游引物。 [0008]第四方面， 本发明提供用于鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖的试剂盒， 所述试剂盒包 括用于检测circLMO7表达水平的试剂。 [0009]进一步地， 所述试剂盒包括SEQ  ID NO:2‑3所示引物。 [0010]第五方面， 本发明提供circLMO7的抑制剂， 所述抑制剂为SEQ  ID NO:8‑9、 SEQ ID  NO:10‑11或SEQ ID NO:12‑13所示的siRNA， 或者上述 三对siRNA的组合。 [0011]第六方面， 本发明提供一种鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖效率的方法， 所述方法包 括： 检测猪骨骼肌卫星细胞中circLMO7的相对表达水平， 若circLMO7的表达水平显著降低， 则表明猪骨骼肌卫星细胞增殖效率低。 [0012]进一步地， 利用SEQ  ID NO:2‑3所示引物检测circLMO7的表达水平。说　明　书 1/7 页 3 CN 115058419 A 3