(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210559168.0 (22)申请日 2022.05.22 (71)申请人 上海交通大 学 地址 200030 上海市徐汇区华 山路1954 号 (72)发明人 崔大祥　刘彬　钱晓庆　倪健　 张春雷　崔明清　 (74)专利代理 机构 上海东亚专利商标代理有限 公司 31208 专利代理师 董梅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种胃癌早期筛查miRNA定量PCR检测试剂 盒 (57)摘要 本发明属于纳米检测技术领域， 涉及一种胃 癌早期筛查 miRNA定量PCR检测试剂盒， 包括检测 胃癌高表达miRNA标志物 的试剂， 所述试剂中含 有检测上述miRNA 的引物或者探针。 发明通过对 胃癌患者血清与尿液样本中提取的外泌体进行 基因测序， 筛选出胃癌血清与尿液外泌体中共有 的高表达miRNA。 本发明还包 括含有高表 达miRNA 的组合及应用。 本发明还涉及利用荧光磁性纳米 粒子定量检测miRNA 的存在、 数量或者表达量的 方法， 用于 辅助早期胃癌的筛查和判断。 权利要求书2页 说明书7页 序列表2页 附图2页 CN 115109851 A 2022.09.27 CN 115109851 A 1.一种试剂， 其特征在于， 所述试剂中含有检测胃癌高表达miRNA的引物或者探针； 所 miRNA选自下列中的一个或者多个： 发明通过对胃癌患 者血清与尿液样本 中提取的外泌体进行基因测序， 筛选出胃癌血清 与尿液外泌体中共有的高表达miRNA； hsa‑miR‑423‑5p、 hsa‑miR‑30c‑5p、 hsa‑miR‑423‑3p、 hsa‑let‑7a‑5p、 hsa‑miR‑122‑ 5p、 hsa‑miR‑342‑3p、 hsa‑miR‑660‑5p、 hsa‑miR‑93‑5p、 hsa‑miR‑125b‑5p、 hsa‑miR‑29b‑ 3p、 hsa‑let‑7i‑5p、 hsa‑let‑7f‑5p、 hsa‑miR‑150‑5p、 hsa‑miR‑143‑3p、 hsa‑miR‑15b‑3p、 hsa‑miR‑21‑5p、 hsa‑miR‑130b‑3p、 hsa‑miR‑22‑3p、 hsa‑miR‑92a‑3p、 hsa‑miR‑191‑5p、 hsa‑miR‑16‑5p、 hsa‑miR‑16‑2‑3p、 hsa‑let‑7b‑5p、 hsa‑let‑7b‑3p、 hsa‑miR‑144‑5p、 hsa‑ miR‑144‑3p、 hsa‑miR‑130a‑3p、 hsa‑miR‑1246、 hsa ‑miR‑185‑5p、 hsa‑miR‑451a、 hsa ‑miR‑ 146a‑5p、 hsa‑miR‑19b‑3p、 hsa‑miR‑32‑5p、 hsa‑miR‑29a‑3p、 hsa‑miR‑486‑5p、 hsa‑miR‑ 486‑3p、 hsa‑miR‑19a‑3p、 hsa‑miR‑29c‑3p、 hsa‑miR‑23b‑3p、 hsa‑miR‑1‑3p、 hsa‑miR‑27a‑ 3p、 hsa‑miR‑142‑5p、 hsa‑miR‑151a‑3p、 hsa‑let‑7g‑5p、 hsa‑miR‑25‑3p、 hsa‑miR‑424‑5p、 hsa‑miR‑328‑3p、 hsa‑miR‑484、 hsa‑let‑7d‑5p、 hsa‑miR‑24‑3p、 hsa‑let‑7d‑3p、 hsa‑miR‑ 223‑3p、 hsa‑let‑7c‑5p、 hsa‑miR‑126‑5p、 hsa‑miR‑126‑3p、 hsa‑miR‑505‑3p、 hsa‑miR‑ 335‑5p、 hsa‑miR‑574‑3p、 hsa‑miR‑23a‑3p、 hsa‑miR‑6087或者hsa ‑miR‑4532。 2.根据权利要求1所述的试剂， 其特征在于， 检测miRNA的引物或者探针与磁性粒子连 接， 所述的磁性粒子是磁性纳米粒子或者 荧光磁性纳米粒子 。 3.根据权利要求1所述的试剂， 其特征在于， 所述的检测miRNA的引物或者探针选自序 列如SEQ ID NO 1‑SEQ ID NO 10的多核苷酸中的一条或者多条； 或者， 所述的检测miRNA的引物选自上述多 核苷酸的两 两组合； 或者， 所述的检测miRNA的引物选自一对或者若干对引物对， 每对引物对含有两条多核 苷酸， 可选的引物对选自： （a） SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2； （b） SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4； （c） SEQ ID NO 5和SEQ ID NO 6； （d） SEQ ID NO 7和SEQ ID NO 8； 或者 （e） SEQ ID NO 9和SEQ ID NO 10。 4.一种胃癌早期筛查miRNA定量PCR检测试剂盒， 其特征在于， 该试剂盒含有如权利要 求1‑3中任意一项所述的试剂。 5.一种组合物， 其特 征在于， 含有一个或者多个miRNA， 所述的miRNA选自： hsa‑miR‑423‑5p、 hsa‑miR‑30c‑5p、 hsa‑miR‑423‑3p、 hsa‑let‑7a‑5p、 hsa‑miR‑122‑ 5p、 hsa‑miR‑342‑3p、 hsa‑miR‑660‑5p、 hsa‑miR‑93‑5p、 hsa‑miR‑125b‑5p、 hsa‑miR‑29b‑ 3p、 hsa‑let‑7i‑5p、 hsa‑let‑7f‑5p、 hsa‑miR‑150‑5p、 hsa‑miR‑143‑3p、 hsa‑miR‑15b‑3p、 hsa‑miR‑21‑5p、 hsa‑miR‑130b‑3p、 hsa‑miR‑22‑3p、 hsa‑miR‑92a‑3p、 hsa‑miR‑191‑5p、 hsa‑miR‑16‑5p、 hsa‑miR‑16‑2‑3p、 hsa‑let‑7b‑5p、 hsa‑let‑7b‑3p、 hsa‑miR‑144‑5p、 hsa‑ miR‑144‑3p、 hsa‑miR‑130a‑3p、 hsa‑miR‑1246、 hsa ‑miR‑185‑5p、 hsa‑miR‑451a、 hsa ‑miR‑ 146a‑5p、 hsa‑miR‑19b‑3p、 hsa‑miR‑32‑5p、 hsa‑miR‑29a‑3p、 hsa‑miR‑486‑5p、 hsa‑miR‑ 486‑3p、 hsa‑miR‑19a‑3p、 hsa‑miR‑29c‑3p、 hsa‑miR‑23b‑3p、 hsa‑miR‑1‑3p、 hsa‑miR‑27a‑权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115109851 A 23p、 hsa‑miR‑142‑5p、 hsa‑miR‑151a‑3p、 hsa‑let‑7g‑5p、 hsa‑miR‑25‑3p、 hsa‑miR‑424‑5p、 hsa‑miR‑328‑3p、 hsa‑miR‑484、 hsa‑let‑7d‑5p、 hsa‑miR‑24‑3p、 hsa‑let‑7d‑3p、 hsa‑miR‑ 223‑3p、 hsa‑let‑7c‑5p、 hsa‑miR‑126‑5p、 hsa‑miR‑126‑3p、 hsa‑miR‑505‑3p、 hsa‑miR‑ 335‑5p、 hsa‑miR‑574‑3p、 hsa‑miR‑23a‑3p、 hsa‑miR‑6087或者hsa ‑miR‑4532。 6.根据权利要求5所述组合物的应用。 7.一种检测如权利要求5所述组合物的方法， 其特征在于， 所述的检测包括但不限于确 定： 如权利要求5所述组合物存在与否、 如权利要求5所述组合物的数量或者表达量。 8.一种如权利要求1至3任一项所述试剂的应用， 其特征在于， 使用权利要求1至3所述 的试剂检测权利要求5所述组合物的存在、 数量或者表达量。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特 征在于， 所述的应用包括以下步骤： （1） 获取待检测的样本； （2） 分离纯化， 获得待检测的样本中的外泌体； （3） 提取步骤 （2） 中外泌体的RNA； （4） 使用权利要求1中所述的试剂检测步骤 （3） 提取的RNA， 或者使用PCR、 定量PCR确定 权利要求5所述组合物的存在、 数量或者表达量。 10. 根据权利要求8所述的应用， 其特 征在于， 所述的应用包括使用以下公式计算p值： p = hsa‑miR‑143‑3p x 0.021 + hsa‑miR‑1246 x 0.025+ hsa‑let‑7g‑5p x 0.035  + hsa‑let‑7c‑5p x 0.028 + hsa‑miR‑23a‑3p x 0.026； 和/或 判断p值是否大于等于2当P  >= 2, 结果是阳性， 高度提示被检测的患者患有早期胃 癌； 当P < 2， 结果是 阴性， 高度提 示被检测的患者， 患有早期胃癌的可能性小。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115109851 A 3