(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210558887.0 (22)申请日 2022.05.21 (71)申请人 中国科学院青岛生物能源与过程研 究所 地址 266100 山东省青岛市崂山区松岭路 189号 (72)发明人 葛安乐　崔超杰　刘沣仪　马波　 徐健　 (74)专利代理 机构 北京维正专利代理有限公司 11508 专利代理师 曹盼 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01)C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 检测非洲猪瘟病毒的双靶标组合、 引物组 合、 试剂、 试剂盒及方法和应用 (57)摘要 本申请属于生物 技术领域， 公开了检测非洲 猪瘟病毒的双靶 标组合、 引物组合、 试剂、 试剂盒 及方法和应用， 所述双靶 标组合为非洲猪瘟病毒 的B646L基因和P1192R基因， 所述引物组合如SEQ   ID NO.1~12所示。 采用本申请引物组合基于RT ‑ LAMP检测体系可快速检测样本中的非洲猪瘟病 毒， 具有检出限低， 特异性好的优点， 且降低了核 酸检测的技术门槛， 普通人经过简单培训便能进 行操作满足对病毒的核酸检测。 权利要求书2页 说明书10页 序列表2页 附图2页 CN 114774590 A 2022.07.22 CN 114774590 A 1.一种检测非洲猪瘟病毒的双靶标组合， 其特征在于， 所述双靶标组合为非洲猪瘟病 毒的B646L基因和P1 192R基因。 2.一种检测非洲猪瘟病毒的引物组合， 其特征在于， 所述引物组合特异性的基于RT ‑ LAMP法检测权利要求1所述非洲猪瘟病毒的B646L基因和P1 192R基因。 3.根据权利要求2所述的一种检测非洲猪瘟病 毒的引物组合， 其特征在于， 所述引物 组 合为用于扩增B646L基因的第一引物组和用于扩增P1 192R基因的第二引物组； 所述第一引物组由第一外引物对、 第一内引物对和第一环引物对组成； 所述第二引物 组由第二外引物对、 第二内引物对和第二环引物对组成； 所述第一外引物对如下(a1)或(a2)： (a1)如SEQ  ID NO.1～2所示的单链DNA分子； (a2)将(a1)中所述单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且 具有相同功能的DNA分子； 所述第一内引物对为如下(b1)或(b2)： (b1)如SEQ  ID NO.3～4所示的单链DNA分子； (b2)将(b1)中所述单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且 具有相同功能的DNA分子； 所述第一环引物对为如下(c1)或(c2)： (c1)如SEQ  ID NO.5～6所示的单链DNA分子； (c2)将(c1)中所述单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且 具有相同功能的DNA分子； 所述第二外引物对为如下(d1)或(d2)： (d1)如SEQ  ID NO.7～8所示的单链DNA分子； (d2)将(d1)中所述单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且 具有相同功能的DNA分子； 所述第二内引物对为如下(e1)或(e2)： (e1)如SEQ  ID NO.9～10所示的单链DNA分子； (e2)将(e1)中所述单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且 具有相同功能的DNA分子； 所述第二环引物对为如下(f1)或(f2)： (f1)如SEQ  ID NO.11～12所示的单链DNA分子； (f2)将(f1)中所述单链DNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且 具有相同功能的DNA分子 。 4.一种检测非洲猪瘟病 毒的试剂， 其特征在于， 所述试剂包含权利要求3 中所述第 一外 引物对、 第一内引物对、 第二外引物对和第二内引物对。 5.根据权利要求4所述的一种检测非洲猪瘟病 毒的试剂， 其特征在于， 所述试剂还包含 权利要求3中所述第一环引物对和第二环引物对。 6.根据权利要求5所述的一种检测非洲猪瘟病 毒的试剂， 其特征在于， 所述第 一外引物 对、 第一内引物对和第一环引物对的摩尔比为8:1:4， 所述第二外引物对、 第二内引物对和 第二环引物对的摩尔比为8 :1:4， 每对引物对中上 下游引物的摩尔比为1:1。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114774590 A 27.一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含权利要求4～5中任 一项所述试剂。 8.一种非疾病诊断检测非洲猪瘟病毒的方法， 其特 征在于， 包括： 对待测样本进行 预处理的步骤； 对预处理得到的样本采用权利要求3所述引物组合进行RT ‑LAMP扩增反应的步骤； 以及 对扩增产物进行分析的步骤。 9.根据权利要求8所述的一种非疾病 诊断检测非洲猪瘟病 毒的方法， 其特征在于， 所述 RT‑LAMP扩增反应条件为： 6 5℃条件下加热40分钟。 10.权利要求3所述引物 组合或权利要求4～5 中任一项所述试剂 或权利要求7所述试剂 盒在如下(g1)或(g2)或(g3)中的应用： (g1)检测或辅助检测非洲猪瘟病毒； (g2)检测或辅助检测待测样本是否含非洲猪瘟病毒； (g3)检测或辅助检测待测样本中非洲猪瘟病毒的含量。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114774590 A 3