(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210550745.X (22)申请日 2022.05.20 (71)申请人 纳昂达 （南京） 生物科技有限公司 地址 210000 江苏省南京市江北新区华康 路142号南京生物医药谷加速器三期 A01栋南侧3 -4层 (72)发明人 胡玉刚　汪彪　曲燕　吴强　 (74)专利代理 机构 北京康信知识产权代理有限 责任公司 1 1240 专利代理师 金田蕴 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6806(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C40B 50/06(2006.01)C40B 40/06(2006.01) (54)发明名称 测序文库接头、 测序文库及其构建方法、 提 升NGS建库连接效率的方法 (57)摘要 本发明提供一种测序文库接头、 测序文库及 其构建方法、 提升NGS建库连接效率的方法。 其 中， 该测序文库接头的3 ’末端为TG(T/A)。 应用本 发明的技术方案， 通过将测序文库接头以TG末尾 来提高连接效率， 进一步的， 以ATG结尾末端进 一 步提高连接效率， 以此提升测序文库的建库效 率。 权利要求书1页 说明书10页 序列表2页 附图6页 CN 114807125 A 2022.07.29 CN 114807125 A 1.一种测序文库接 头， 其特征在于， 所述测序文库接 头的3’末端为TG(T/A)。 2.根据权利要求1所述的测序文库接头， 其特征在于， 所述测序文库接头的3 ’末端为 ATG(T/A)。 3.根据权利要求1或2所述的测序文库接头， 其特征在于， 所述测序文库接头的末端T碱 基3’端的‑OH上的O用S修饰。 4.根据权利要求1或2所述的测序文库接头， 其特征在于， 所述测序文库接头为双端测 序文库接 头或单端测序文库接 头。 5.根据权利要求1或2所述的测序文库接头， 其特征在于， 所述测序文库接头为在MGI或 Illumina测序平台的测序文库接 头序列基础上改变末端碱基获得。 6.根据权利要求5所述的测序文库接头， 其特征在于， 所述测序文库接头从5 ’端到3’端 包括测序引物结合区和分子标签， 部分所述分子标签接 头末端的T改为C； 优选的， 10％～ 20％的所述分子标签末端的T改为C； 优选的， 所述测序文库接 头具有如SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2所示的序列； 或 如SEQ ID NO： 3和SEQ  ID NO： 4所示的序列。 7.一种测序文库构建试剂盒， 其特征在于， 包括如权利要求1至6中任一项所述的测序 文库接头。 8.一种测序文库的构建方法， 其特征在于， 包括将如权利要求1至6中任一项所述的测 序文库接 头连接到待测序的目的片段 上。 9.一种测序文库， 其特征在于， 所述测序文库为通过如权利要求8所述的测序文库的构 建方法构建而成。 10.根据权利要求8所述的测序文库， 其特征在于， 所述测序文库 为用于MGI和Illumina 测序平台的测序文库。 11.一种提升NGS建库连接效率的方法， 其特 征在于， 包括： 将测序文库接 头的3’末端设计为TG， 以及 将所述测序文库接 头与待测目的片段通过T/A连接 。 12.根据权利要求11所述的方法， 其特征在于， 将所述测序文库接头的3 ’末端设计为 ATG； 优选的， 所述测序文库接 头的末端 T碱基3’端的‑OH上的O用S修饰； 优选的， 所述测序文库接 头为双端测序文库接 头或单端测序文库接 头； 优选的， 所述测序文库接头为在MGI或Illumina测序平台的测序文库接头序列基础上 改变末端碱基获得； 优选的， 所述测序文库接头从5 ’端到3’端包括测序引物结合区和分子标签， 部分所述 分子标签接 头末端的T改为C； 更优选的， 10％的所述分子标签末端的T改为C； 进一步优选的， 所述测序文库接头具有如SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2所示的序列； 或 如SEQ ID NO： 3和SEQ  ID NO： 4所示的序列。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807125 A 2测序文库接头、 测序文库及其构建 方法、 提升NGS建库连接效 率的方法 技术领域 [0001]本发明涉及测 序文库构建技术领域， 具体而言， 涉及一种测 序文库接头、 测 序文库 及其构建方法、 提升NGS建库连接效率的方法。 背景技术 [0002]高通量测序作为重要的临床准确诊断获取信息的手段， 科研人员 和临床医生越来 越重视NGS在 临床诊断中的应用。 目前， 在肿 瘤的靶向治疗方面， 由于大量的FFPE样本有不 同程度的降解， 在肿瘤早筛和无创 产前检测过程中， 需要用cf/ctDNA样 本进行建库， 如何提 升建库效率， 充分利用有限的信息是人们探索的一致方向。 在以往的探索过程中， 有优化建 库连 接效 率的 酶 和缓 冲液 、 单 链建 库 (U S9 8967 0 9) 和平端腺 苷化连 接的 (US20190010540A1)。 虽然单链建库和平端腺苷化连接能够提升连接效率， 但是由于这些建 库流程过程过长和操作复杂， 在做复杂样 本时并不一定表现出优势。 在基于A ‑T连接的优化 酶和缓冲液的提升方面几乎已经到了尽头， 因为加A效率限制、 5 ’端碱基的无法修复和磷酸 化限制导 致这种提升 。 [0003]由于目前大部分测 序平台的建库接头 都是基于A ‑T连接实现， 并且固定接头末端， 由于测序引物也是配套固定的序列， 在改进加A效率不完全时的其它补救措施都不能实现 提升连接效率。 [0004]因此， 亟待开发新的方法进一 步提升建库效率。 发明内容 [0005]本发明旨在提供一种测 序文库接头、 测 序文库及其构建方法、 提升NGS建库连接效 率的方法， 以提升建库效率。 [0006]为了实现上述目的， 根据本发明的一个方面， 提供了一种测 序文库接头。 该测 序文 库接头的3’末端为TG(T/A)。 [0007]进一步地， 测序文库接 头的3’末端为ATG(T/A)。 [0008]进一步地， 测序文库接 头的末端 T碱基3’端的‑OH上的O用S修饰。 [0009]进一步地， 测序文库接 头为双端测序文库接 头或单端测序文库接 头。 [0010]进一步地， 测序文库接头为在MGI或Illumina测序平台的测序文库接头序列基础 上改变末端碱基获得。 [0011]进一步地， 测序文库接头从5 ’端到3’端包括测序引物结合区和分子标签， 部分分 子标签的T改为C； 优选的， 10％的分子标签末端的T改为C； 优选的， 测序引物结合区的3 ’端 增加碱基C； 优选的， 测序文库接头具有如SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2所示的序列； 或如SEQ   ID NO： 3和SEQ  ID NO： 4所示的序列。 [0012]根据本发明的另一方面， 提供了一种测序文库构建试剂盒。 该测序文库构建试剂 盒包括上述任一种测序文库接 头。说　明　书 1/10 页 3 CN 114807125 A 3