(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210529563.4 (22)申请日 2022.05.16 (71)申请人 中国林业科 学研究院亚热 带林业研 究所 地址 311400 浙江省杭州市富阳区大桥路 73号 (72)发明人 张成才　姚小华　任华东　常君　 王开良　 (74)专利代理 机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 专利代理师 商秀玲 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于鉴定薄壳山核桃品种的SSR分子标记、 分子身份 证及其应用 (57)摘要 本发明涉及植物品种分子鉴定技术领域， 具 体涉及用于鉴定薄壳山核桃品种的SSR分子标 记、 分子身份证及其应用。 本发明提供的用于鉴 定薄壳山核桃品种的SSR分子标记能够实现36个 主要薄壳山核桃品种的鉴别， 具有较高的准确性 和判别结果稳定性， 且操作简单， 鉴别所需时间 短， 便于在实践中推广应用。 本发明还建立了品 种特异的分子指纹图谱及其分子身份证数字编 码、 条形码和二维码， 实现了36个主要薄壳山核 桃品种的有效区分， 为薄壳山核桃品种鉴定、 种 苗纯度检测、 品种追溯提供了有效的方法。 权利要求书3页 说明书14页 序列表8页 附图4页 CN 114990249 A 2022.09.02 CN 114990249 A 1.用于鉴定薄壳山核桃品种的SSR分子标记， 其特征在于， 所述SSR分子标记包括以下 (1)～(5)中S SR分子标记的任意 一个或多个： (1)由序列如SEQ  ID NO.1‑2所示的引物对 扩增得到； (2)由序列如SEQ  ID NO.3‑4所示的引物对 扩增得到； (3)由序列如SEQ  ID NO.5‑6所示的引物对 扩增得到； (4)由序列如SEQ  ID NO.7‑8所示的引物对 扩增得到； (5)由序列如SEQ  ID NO.9‑10所示的引物对 扩增得到 。 2.用于鉴定薄壳山核桃品种的引物对， 其特征在于， 所述引物对包括以下引物对中的 任意一个或多个： 序列如SEQ  ID NO.1‑2所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.3‑4所示的引物 对、 序列如SEQ  ID NO.5‑6所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.7‑8所示的引物对、 序列如SEQ   ID NO.9‑10所示的引物对。 3.用于鉴定薄壳山核桃品种的SSR分子标记， 其特征在于， 所述SSR分子标记包括以下 (1)～(23)中S SR分子标记的任意 一个或多个： (1)由序列如SEQ  ID NO.1‑2所示的引物对 扩增得到； (2)由序列如SEQ  ID NO.3‑4所示的引物对 扩增得到； (3)由序列如SEQ  ID NO.5‑6所示的引物对 扩增得到； (4)由序列如SEQ  ID NO.7‑8所示的引物对 扩增得到； (5)由序列如SEQ  ID NO.9‑10所示的引物对 扩增得到； (6)由序列如SEQ  ID NO.11‑12所示的引物对 扩增得到； (7)由序列如SEQ  ID NO.13‑14所示的引物对 扩增得到； (8)由序列如SEQ  ID NO.15‑16所示的引物对 扩增得到； (9)由序列如SEQ  ID NO.17‑18所示的引物对 扩增得到； (10)由序列如SEQ  ID NO.19‑20所示的引物对 扩增得到； (11)由序列如SEQ  ID NO.21‑22所示的引物对 扩增得到； (12)由序列如SEQ  ID NO.23‑24所示的引物对 扩增得到； (13)由序列如SEQ  ID NO.25‑26所示的引物对 扩增得到； (14)由序列如SEQ  ID NO.27‑28所示的引物对 扩增得到； (15)由序列如SEQ  ID NO.29‑30所示的引物对 扩增得到； (16)由序列如SEQ  ID NO.31‑32所示的引物对 扩增得到； (17)由序列如SEQ  ID NO.33‑34所示的引物对 扩增得到； (18)由序列如SEQ  ID NO.35‑36所示的引物对 扩增得到； (19)由序列如SEQ  ID NO.37‑38所示的引物对 扩增得到； (20)由序列如SEQ  ID NO.39‑40所示的引物对 扩增得到； (21)由序列如SEQ  ID NO.41‑42所示的引物对 扩增得到； (22)由序列如SEQ  ID NO.43‑44所示的引物对 扩增得到； (23)由序列如SEQ  ID NO.45‑46所示的引物对 扩增得到 。 4.用于鉴定薄壳山核桃品种的引物对， 其特征在于， 所述引物对包括以下引物对中的 任意一个或多个： 序列如SEQ  ID NO.1‑2所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.3‑4所示的引物 对、 序列如SEQ  ID NO.5‑6所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.7‑8所示的引物对、 序列如SEQ  权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114990249 A 2ID NO.9‑10所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.11‑12所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.13‑ 14所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.15‑16所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.17‑18所示的 引物对、 序列如SEQ  ID NO.19‑20所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.21‑22所示的引物对、 序 列如SEQ ID NO.23‑24所示的引 物对、 序列如SEQ  ID NO.25‑26所示的引 物对、 序列如SEQ   ID NO.27‑28所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.29‑30所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.31‑ 32所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.33‑34所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.35‑36所示的 引物对、 序列如SEQ  ID NO.37‑38所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.39‑40所示的引物对、 序 列如SEQ ID NO.41‑42所示的引 物对、 序列如SEQ  ID NO.43‑44所示的引 物对、 序列如SEQ   ID NO.45‑46所示的引物对。 5.试剂盒， 其特 征在于， 包 含权利要求2或4所述的用于鉴定薄壳山核桃品种的引物对。 6.DNA芯片， 其特征在于， 包含权利要求2或4所述的用于鉴定薄壳山核桃品种的引物 对。 7.权利要求1或3所述的用于鉴定薄壳山核桃品种的SSR分子标记或权利要求2或4所述 的用于鉴定 薄壳山核桃品种的引物对或权利要求5所述的试剂盒或权利要求6所述的DNA芯 片的以下任一种应用： (1)在鉴定薄壳山核桃品种中的应用； (2)在构建 薄壳山核桃品种DNA指纹数据库中的应用； (3)在薄壳山核桃种质资源遗传多样性分析、 种子或种苗纯度检测中的应用； (4)在薄壳山核桃的品种溯源或亲缘关系分析中的应用； (5)在薄壳山核桃分子标记辅助育种中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述薄壳山核桃品种为 ‘Oconee’、 ‘Kiowa’、‘Shawnee ’、‘Waco’、‘Hopi’、‘Forkert ’、‘Maramec ’、‘Mahan’、‘Navaho’、 ‘Desirable ’、‘Barton’、‘Carter’、‘Deerstand ’、‘Shepherd ’、‘Osage’、‘Chetopa’、 ‘Elliott’、‘Major’、‘Yates68’、‘Posey’、‘Colby’、‘Mcmillan ’、‘Mohawk’、‘Gloria  Grande’、‘Silverback ’、‘Graking’、‘Lakota’、‘Nacono’、‘Houma’、‘Creek’、‘Kanza’、 ‘Stuart’、‘Jayhawk’、‘Choctaw’、‘Pawnee’、‘Greenriver’中的一种或多种。 9.一种薄壳山核桃品种分子身份证的构建方法， 其特征在于， 所述方法包括： 以薄壳山 核桃的基因组DNA为模板， 采用序列如SEQ  ID NO.1‑2所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.3‑4 所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.5‑6所示的引物对、 序列如SEQ  ID NO.7‑8所示的引物对 以及序列如SEQ  ID NO.9‑10所示的引物对进行PCR扩增， 得到PCR扩增产物， 对所述PCR扩增 产物进行电泳检测， 将P CR扩增产 物的电泳条带的不同带型分别以不同的赋值进 行区分， 构 建薄壳山核桃品种的分子身份 证； 所述薄壳山核桃品种为 ‘Oconee’、‘Kiowa’、‘Shawnee’、‘Waco’、‘Hopi’、‘Forkert’、 ‘Maramec ’、‘Mahan’、‘Navaho’、‘Desirable ’、‘Barton’、‘Carter’、‘Deerstand ’、 ‘Shepherd ’、‘Osage’、‘Chetopa’、‘Elliott’、‘Major’、‘Yates68’、‘Posey’、‘Colby’、 ‘Mcmillan ’、‘Mohawk’、‘Gloria Grande’、‘Silverback ’、‘Graking’、‘Lakota’、‘Nacono’、 ‘Houma’、‘Creek’、‘Kanza’、‘