ICS 11.220 CCS B 41 DB63 青 海 省 地 方 标 准 DB63/T 1940—2021 牦牛副伤寒防治技术规范 2021 - 08 - 18 发布 青海省市场监督管理局 2021 - 09 - 20 实施 发 布 DB63/T 1940—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由青海省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：青海省动物疫病预防控制中心。 本文件起草人：阚威、蔡金山、赵全邦、王谢忠、游潇倩、孙生祯、宋永鸿、马艳萍、魏梦君、刘 蓉菁、张晓英、曾占豪、黄文颖、胡广卫、李静、王晓润、张总超、陈国娟、陈长江、何小红、张选涛、 马元莲。 本文件由青海省农业农村厅监督实施。 I DB63/T 1940—2021 牦牛副伤寒防治技术规范 1 范围 本文件规定了牦牛副伤寒诊断、预防和治疗。 本文件适用于牦牛副伤寒的防治。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 4789.4-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验 NY/T 388 畜禽场环境质量 DB63/T 1938 牦牛常用疫苗使用技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 牦牛副伤寒 由都柏林沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌等沙门氏菌感染所引起的一种人畜共患传染 病，主要表现为败血症和胃肠炎的症状。 4 诊断 4.1 流行病学诊断 主要危害2周龄～6周龄的犊牛，1周龄犊牛中可见发病，部分内源性感染引起。犊牛多见于9月至次 年3月，成年牦牛则较多在夏季和秋季患病。 4.2 临床诊断 4.2.1 典型症状 4.2.1.1 败血症 表现为菌血症、毒血症，在2 d～4 d内死亡，未见临床症状。 4.2.1.2 胃肠炎 1 DB63/T 1940—2021 表现为胃肠炎，表现为全身发热，黄痢，严重时为剧烈腹泻，粪便呈水样，恶臭，带血。 4.2.2 其他症状 4.2.2.1 肺炎 表现为嗜睡、发热、卧地不起，脉搏和呼吸加快、食欲减退。咳嗽和腹式呼吸，呼气延长，伴有呻 吟和腹壁搏动。 4.2.2.2 关节炎 通常关节炎发生的较迟，发炎的多为膝关节和腓头节。 4.2.2.3 流产 在怀孕第4个月～9个月发生流产。 4.3 病理学诊断 4.3.1 典型症状 4.3.1.1 败血症 成年牛主要发生败血症病变。心外膜、胸膜、肝脏、肾脏皮质、膀胱、胃肠黏膜有小点出血，肝脏 充血性肿大。 4.3.1.2 胃肠炎 卡他性胃肠炎和肠系膜淋巴结的髓样肿胀，在较重的病例可见到出血性肠炎，在鼠伤寒沙门氏菌感 染可表现为坏死性肠炎。 4.3.2 其他症状 4.3.2.1 肺炎 肺脏中可以见到卡他性化脓性支气管炎，可能形成脓肿，也可能发生呈大叶性或小叶性分布的纤维 蛋白性肺炎。 4.3.2.2 关节炎 关节和腱鞘可能肿胀，关节囊和鞘囊增厚，囊液增多，含有凝块。 4.3.2.3 流产 流产母牛中可以见到子宫黏膜增厚、绒毛叶坏死以及胎盘水肿而呈黄灰色。 4.4 实验室诊断 4.4.1 样品采集 无菌采集患病牦牛新鲜粪便、肛拭子，以及病死牦牛或剖检牦牛的肝脏、脾脏、肺脏和肠内容物。 4.4.2 样品保存与运输 2 DB63/T 1940—2021 样品于4℃冰箱内保存，并在24h内送到实验室。若在24 h内不能送达的，应将样品放入50%的甘油 生理盐水中(配制和制法见附录A)，混匀，置于﹣20℃或﹣70℃冰箱内保存。 4.4.3 培养方法 4.4.3.1 组织样品 取组织样品，无菌条件下在非选择性琼脂（普通营养琼脂或鲜血琼脂，配方和制法见附录A）平板 和选择性琼脂（麦康凯琼脂、HE琼脂、XLD琼脂、BS琼脂或沙门氏菌显色培养基等）平板上划线接种， 置于37℃培养24 h～48 h；或将组织匀浆1:10的体积接种缓冲蛋白胨水（BPW）,置于37℃培养4 h～8 h 后，按1:10的体积转接种SC增菌液或TTB增菌液，分别置于37℃（SC增菌液）或42℃（TTB增菌液）培养 24 h，接种选择性琼脂平板，置于37℃培养24 h～48 h。 4.4.3.2 肛拭子、新鲜粪便、肠内容物等样品 肛拭子、新鲜粪便、肠内容物等样品按1:10的体积接种SC增菌液或TTB增菌液，置于37℃（SC增菌 液）或42℃（TTB增菌液）培养24 h，接种选择性琼脂平板，置于37℃培养24 h～48 h。 4.4.4 可疑菌落特征 沙门氏菌在不同培养基上的菌落特征见表1。 表1 沙门氏菌属在不同培养基上的菌落特征 培养基种类 普通营养琼脂 血琼脂 麦康凯琼脂 HE琼脂 BS琼脂 XLD琼脂 沙门氏菌属显色培养基 沙门氏菌的菌落特征 菌落无色、透明或半透明，圆形、光滑、较偏平 灰白色、不溶血 无色至浅橙色，透明或半透明，中心有时为暗色 蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或全黑色 黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈现黑色或棕色，有些菌株形成 灰绿色的菌落，周围培养基颜色不变 粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑 色的菌落，有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心 按照显色培养基的说明进行判定 4.4.5 细菌生化鉴定 沙门氏菌属生化特性鉴定表进行生化鉴定，见表2。 3 DB63/T 1940—2021 表2 沙门菌属生理生化指标 产气 苯 菌名 硫化 丙 氢 氨 MR VP 枸橼 酸盐 酸 尿 赖 氨 素 酸 脱 酶 羧酶 产酸 侧 鸟氨酸 脱羧酶 葡 萄 卫 矛 糖 醇 山 金 梨 盏 醇 花 木 糖 醇 沙门氏菌 +/- - + - + - + + + +/- + - + 注：+/-，21%～79%阳性。 4.4.6 血清型鉴定 4.4.6.1 按照 GB 4789.4-2016 中 5.5、5.6 的规定执行。 4.4.6.2 都柏林沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌的抗原组分见表 3。 表3 都柏林沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌抗原组分 菌名 血清群 O抗原 都柏林沙门氏菌 D1 鼠伤寒沙门氏菌 B H抗原 第Ⅰ相 第Ⅱ相 1,9,12 g,p 无 1,4,5,12 i 1,2 4.4.7 结果判定 同时符合4.4.4和4.4.5的结果，判定样品中检出沙门氏菌。 4.5 诊断结果判定 综合4.1、4.2、4.3、4.4的内容，诊断为牦牛副伤寒。 5 预防 5.1 饲养管理 5.1.1 5.1.2 5.1.3 5.1.4 5.1.5 5.1.6 5.1.7 定期清除粪尿、鼠害和蝇害。 围产期补饲，增强机体抵抗力。 哺乳期减少挤奶，避免外源性感染。 产后，犊牛吃足初乳，应防寒保暖，加强护理。 不应饲喂变质饲料，合理饲用精粗饲料比例。 发现病牛及时隔离，做好确诊和相应治疗。 建立严格的防疫制度，杜绝其他传染病的侵入。 5.2 免疫接种 4 DB63/T 1940—2021 在染疫严重的牦牛群和地区，每年应进行免疫接种。选择牛副伤寒灭活菌进行免疫预防，使用方法、 注意事项，按DB63/T 1938执行。 5.3 消毒 5.3.1 环境卫生条件 棚圈环境卫生质量符合NY/T 388的有关规定。 5.3.2 消毒药物选择及方法 选择对病原体消毒力强、对人畜环境毒性小、不损害被消毒的物体、易溶于水，在消毒环境中比较 稳定，不易失去消毒作用的消毒药物。定期对圈舍、用具、环境消毒，消毒药物及消毒方法参照附录 B 执行。 6 治疗 6.1 治疗原则 消除炎症，对症治疗，加强护理。 6.2 治疗 6.2.1 首先应将病牛及可疑牛隔离饲养，治疗时先消除炎症，抑制病原菌的生长，防止败血症。 6.2.2 如果病牛发生严重下痢，应采取对症治疗，及时补液，避免脱水和自体中毒，同时加强护理。 6.2.3 由于沙门菌易出现耐药菌株，使用一种药物治疗无效时，可换另一种药物，宜先做药敏试验, 选择敏感药物进行治疗。 6.2.4 治疗方法参照附录 C 执行。 5 DB63/T 1940—2021 AA 附 录 A （资料性） 保存液及培养基配方和制法 A.1 50%甘油生理盐水 取氯化钠8.5 g、蒸馏水500 mL、中性甘油500 mL，混合后分装，121℃高压灭菌15 min，备用。 A.2 普通营养琼脂 按表A.1的规定将各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2 mL，调pH至7.2～7.4。加入琼 脂，加热煮沸，使琼脂溶化，分装，121℃高压灭菌15 min。 表A.1 普通营养琼脂配方 成分 质量（体积） 蛋白胨 10 牛肉膏 3 氯化钠 5 琼脂 15g～20g 蒸馏水 1000mL A.3 鲜血琼脂 取高压灭菌的普通营养琼脂待冷至45℃～50℃，用无菌操作于每100 mL营养琼脂中加灭菌脱纤维羊 血或兔血5 mL～10 mL，轻轻摇匀，立即倾注与平板或分装试管，制备成斜面备用。 6 DB63/T 1940—2021 BB 附 录 B （资料性） 消毒药物及方法 表B.1给出了消毒药物的选择及消毒方法。 表B.1 消毒药物选择及消毒方法 消毒环境 圈 舍 消毒剂选择 推荐消毒剂 3%氢氧化钠 消毒方法 注意事项 喷洒 消毒药物不能长期使 场 区 石灰乳 生石灰1份加水1份制成熟石灰 用 1 种，至少要 3 种以 0.2%过氧乙酸、 （氢氧化钙，或称消石灰），用 上交替使用，不能混合 0.5%次氯酸钠 水配成10%～20%的混悬液喷洒 使用；石灰乳应现用现 消毒，或者生石灰1kg加水350mL 配，最好当天用完。 化开而成的粉末，撒布在场区周 围环境等处进行消毒。 7 DB63/T 1940—2021 CC 附 录 C （资料性） 治疗药物及方法 表C.1给出了治疗药物及方法。 表C.1 治疗药物及方法 药物选择 治疗方案 首选药物 治疗方法 肌肉注射 药物名称 5%痢菌净 用法用量 注意事项 肌 肉 注 射 配合采取补液、强心、纠正酸中毒等对症治 5mL，每天 1 疗。可静脉注射 150mL5%碳酸氢钠、250mL25% 次 葡萄糖液、500mL5%糖盐水。若因腹泻，发生 西药治疗 严重脱水时，静脉注射等渗溶液：生理盐水 每千克体重 次选药物 灌 服 复方新诺明 灌服 70 ㎎， 每天