ICS 11.220 CCS B 41 云 53 南 省 地 方 标 准 DB53/T 1057—2021 滇金丝猴肠道微生物组数据获取技术规程 Regulation for data acquisition of gut microbiota for Rhinopithecus bieti 2021 - 09 - 30 发布 云南省市场监督管理局 2021 - 10 - 14 实施 发 布 DB53/T 1057—2021 目  次 前言................................................................................................................................................................... III 1 范围................................................................................................................................................................. 1 2 规范性引用文件............................................................................................................................................. 1 3 术语和定义..................................................................................................................................................... 1 4 基本要求......................................................................................................................................................... 2 4.1 4.2 实验室通用要求..................................................................................................................................... 2 主要试剂及仪器设备............................................................................................................................. 2 5 样品采集和保存............................................................................................................................................. 2 6 滇金丝猴肠道微生物总 DNA 提取及检测.................................................................................................... 2 6.1 6.2 6.3 7 肠道微生物组高通量测序............................................................................................................................. 2 7.1 7.2 7.3 7.4 8 试剂盒选取............................................................................................................................................. 2 肠道微生物总 DNA 提取......................................................................................................................... 2 肠道微生物总 DNA 质量检测.................................................................................................................2 肠道微生物 16S rRNA 基因引物选取及扩增.................................................................................... 2 肠道微生物 16S rRNA PCR 扩增产物电泳检测及纯化.................................................................. 3 肠道微生物 16S rRNA 基因测序.........................................................................................................3 肠道微生物宏基因组测序..................................................................................................................... 3 肠道微生物组数据获取................................................................................................................................. 3 8.1 8.2 8.3 8.4 16S rRNA 基因数据质控...................................................................................................................... 3 宏基因组数据质控................................................................................................................................. 3 宏基因组数据去除宿主信息.................................................................................................................3 肠道微生物组数据获取......................................................................................................................... 3 附录 A （规范性） 主要试剂及仪器设备................................................................................................... 4 附录 B （规范性） 粪便样品的采集和保存方法....................................................................................... 5 附录 C （规范性） 总 DNA 样品的提取步骤、琼脂糖凝胶电泳检测及成像方法................................... 8 附录 D （规范性） 16S rRNA PCR 引物、反应体系、反应时间及产物纯化步骤.............................. 9 I DB53/T 1057—2021 前  言 本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由云南省林业与草原局、云南省市场监督管理局共同提出。 本文件由云南省林业标准化技术委员会（YNTC02）归口。 本文件主要起草单位：云南大学、云南省标准化研究院。 本文件主要起草人：于黎、黄艳梅、张志刚、朱勋程、李依恬、李宁、刘纯兵、徐志茹、姚雪沁、 胡靖扬、吴宏、匡卫民。 III DB53/T 1057—2021 滇金丝猴肠道微生物组数据获取技术规程 1 范围 本文件规定了滇金丝猴（Rhinopithecus bieti）肠道微生物组数据获取的基本要求、样品采集和保存、 肠道微生物总DNA提取及检测、肠道微生物组高通量测序、肠道微生物组数据获取。 本文件适用于野外及圈养滇金丝猴微生物组数据获取。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 肠道微生物 gut microbiota 动物肠道中存在的数量庞大的微生物，并帮助宿主完成多种生理生化功能的微生物群落。 3.2 肠道微生物总 DNA gut microbiota total DNA 肠道内所有微生物DNA和部分宿主DNA的总和。