ICS 65.020.01 B 39 DB61 陕 西 省 地 方 标 准 DB 61/T 1158.3—2018 桑黄标准综合体 第 3 部分：菌种生产技术规程 Integrated Standards of Phellinus spp.— Part 3：Technical Rules for Inoculum Preparation 2018 - 05 - 01 发布 陕西省质量技术监督局 2018 - 06 - 01 实施 发 布 DB61/T 1158.3—2018 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 栽培场地 .......................................................................... 1 4 栽培环境 .......................................................................... 1 5 栽培设施 .......................................................................... 2 附录A（规范性附录） 食用菌生产场所处理方法 .......................................... 3 I DB61/T 1158.3—2018 前 言 DB61/T 1158—2018《桑黄标准综合体》分为六个部分： ——第 1 部分：生产环境； ——第 2 部分：菌种； ——第 3 部分：菌种生产技术规程； ——第 4 部分：液体菌种生产技术规程； ——第 5 部分：桑黄栽培技术规程； ——第 6 部分：子实体干品质量要求。 本部分为 DB61/T 1158—2018 的第 3 部分。 本部分按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本部分由陕西省农业厅提出并归口。 本部分起草单位：陕西省微生物研究所、杨凌康宇生物科技有限公司、陕西省园艺蚕桑工作站。 本部分主要起草人：雷萍、吴亚召、张文隽、渠敬峰、王周平、霍国琴、杜芳、杜艳、雷丽、王勇。 本部分由陕西省微生物研究所负责解释。 本部分首次发布。 联系信息如下： 单位：陕西省微生物研究所 地址：西安市雁塔区西影路 76 号 邮编：710043 电话：029-82357027 II DB61/T 1158.3—2018 桑黄标准综合体 第 3 部分：菌种生产技术规程 1 范围 DB61/T 1158 的本部分规定了桑黄菌种生产的生产技术、质量检验、入库留样和菌种档案的要求。 本部分适用于桑黄各级菌种生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4806.7 食品接触用塑料材料及制品 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1284 食用菌菌种中杂菌及害虫的检验 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求 DB61/T 1158.2 桑黄标准综合体 第2部分：菌种 《食用菌菌种管理办法》中华人民共和国农业部第62号令（2006年3月27日） 3 生产技术 3.1 一般要求 3.1.1 应按《食用菌菌种管理办法》的规定配备菌种生产技术人员和检验人员。 3.1.2 应按 NY/T 528 要求制定工艺流程，并制定岗位操作规程，明确主要生产环节工序操作要求及岗 位职责。 3.2 生产区的设置与布局 3.2.1 生产区的设置 生产区应设置摊晒场、原材料库、配料分装室（场）、灭菌室、冷却室、接种室、培养室和贮存室、 菌种检验室，并应符合NY/T 528规定要求。 3.2.2 生产区的布局 生产区按照菌种制种工艺流程布局，各操作环节按顺序形成一条流水线，灭菌前的操作区域与灭菌 后的操作区域相隔离，出黄场与菌种生产、培养车间隔离。储料室（库）、晒料场、废物堆积场等带有 杂菌的区域应处于场地的下风口。 3.3 3.3.1 设施、设备 生产区的设施配套，冷却室、接种室、培养室和贮存室均应具备调温设施。 1 DB61/T 1158.3—2018 3.3.2 磅秤、天平、蒸煮设备、母种培养基分装设备、拌料机、装袋机、高压灭菌和常压灭菌设备、 接种工具、恒温培养箱、培养架、烘箱、除湿机、电冰箱、质量检测仪器设备及其它工器具。 3.4 清洁消毒 3.4.1 保持厂区、车间、走道等清洁干净，每周使用消毒剂拖擦地面一次；每月对冰箱、空调、空气 过滤网清洁一次。及时清洗使用完毕的机械设备。 3.4.2 培养室使用前 2d及每批次菌种培养结束后，均需对培养室进行消毒。可使用 66％二氧异氰尿酸 3 3 钠烟剂 3g/m ～4g/m 密闭熏蒸 24h，然后打开门窗通风换气。 3.4.3 冷却室、接种室、缓冲室使用前后，均进行消毒。接种箱或无菌操作台每次使用结束，用消毒 液擦拭干净。 3.4.4 接种人员进入接种室前，更换工作服、帽、鞋，并洗手、消毒。 3.5 菌种来源 3.5.1 应使用种性清楚或者是经过农作物品种审定委员会登记的桑黄菌种。 3.5.2 所有生产菌种应每年进行出黄试验，性状稳定的方可投入生产使用。出黄试验最小规模 45 袋， 分三组重复，每组 15 袋。母种每年在种源扩大生产前应进行纯度、活力、菌丝长势的一致性、菌丝生 长速度、菌落外观及出黄试验。出黄试验方法及种源质量要求应符合 NY/T 1742 中 5.4 的规定。 3.6 移植扩大 母种仅用于移植扩大原种，一支母种移植扩大原种不应超过6 瓶（袋）；1 瓶（袋）原种移植扩大 栽培种不应超过50瓶（袋）。 3.7 母种生产 3.7.1 生产工艺流程 培养基配制→分装→灭菌→冷却摆斜面→无菌检验→接种→培养→检验→成品。 3.7.2 容器 使用18mm×180mm或20mm×200mm的玻璃试管。试管塞采用棉塞（梳棉或化纤棉）或硅胶塞。 3.7.3 培养基 按照DB61/T 1158.2附录A规定配制。 3.7.4 分装 将配制好的培养基立即分装，装量为试管长度的1/4～1/5。试管口应保持干净，随后塞入棉塞或硅 胶塞，并用牛皮纸包扎。 3.7.5 灭菌 将分装和包扎好的试管直立放在高压灭菌锅内加热灭菌，打开排气阀，放气15min，关闭排气阀。 当压力升到0.14MPa（温度为121℃）时，恒压30min。 3.7.6 2 斜面培养基摆放 DB61/T 1158.3—2018 灭菌结束后，自然降压至指针回到零点，打开放气阀，自然降温20min～30min，并利用余热烘干棉 塞。从灭菌锅内取出试管倾斜摆放在操作台面上，斜面长度为试管长度的2/3。 3.7.7 灭菌效果检查 按2%随机抽取母种培养基置于25℃±2℃恒温培养48h，检查有无细菌或霉菌感染。 3.7.8 接种 3.7.8.1 接种室（箱）或净化工作台的消毒 按照NY/T 528的规定，进行接种箱（室）或无菌操作台及其内部的接种用具消毒。 3.7.8.2 接种操作 检查、核对菌种。严格按照无菌操作接种。接完种后及时贴好标签。 3.7.8.3 培养 接种后将试管置于27℃±2℃培养箱或培养室中培养9d～15d，当菌丝长满试管斜面，即可用于生产 原种。 3.8 原种生产 3.8.1 容器 使用13cm×23cm或15cm×28cm规格、耐126℃高温的玻璃瓶或聚乙（丙）烯塑料袋。使用满足滤菌 和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞。 3.8.2 生产工艺流程 按培养基配方备料→配制培养基→预湿和拌料→装瓶（袋）→高压灭菌→冷却至室温→接种→培养、 检查→成品。 3.8.3 培养基 按照DB61/T 1158.2附录B规定配制。 3.8.4 培养基配制 棉籽壳、木屑使用前进行预湿处理。按照配方量取各种原材料，严格按料水比加水进行人工或机械 搅拌，混合均匀。 3.8.5 装瓶（袋） 培养料分装在玻璃瓶或聚乙（丙）烯塑料袋内，松紧适度。将袋口和袋外壁擦干净后塞棉塞，牛皮 纸包扎袋口。也可以用无棉塑料盖封口。 3.8.6 灭菌 将分装好的原种培养料移入高压锅内，升压至0.15MPa，温度121℃～125℃灭菌2h。 3.8.7 冷却 3 DB61/T 1158.3—2018 灭菌结束后，自然降压至指针回到零点，打开放气阀，自然降温20min～30min，取出菌种瓶（袋）， 移入冷却室，袋内温度冷却至28℃以下准备接种。 3.8.8 接种 3.8.8.1 接种室（箱）或净化工作台的消毒 按照 NY/T 528的规定，进行接种箱（室）或无菌操作台及其内部的接种用具消毒。 3.8.8.2 接种操作 接种前一天将母种检查准备好，接种时再核对确保无误。严格按照无菌操作接种。接种结束及时贴 好标签。每支母种接原种4 瓶（袋）～6 瓶（袋）。 3.8.8.3 培养 接种后将原种瓶（袋）置于27℃±2℃培养室内培养30d～35d，当菌丝长满瓶（袋）时结束培养， 即可用于生产栽培种。 3.9 栽培种生产 3.9.1 容器 使用15cm×28cm×0.005cm或17cm×35cm×0.005cm规格、耐126℃高温，并符合GB 4806.7规定的聚 乙（丙）烯塑料袋。用无棉塑料盖封口。 3.9.2 培养基 按照DB61/T 1158.2附录B规定配制。 3.9.3 培养基配制 按照本部分3.8.4规定执行。 3.9.4 装袋 按照本部分3.8.5规定执行。 3.9.5 灭菌 高压灭菌：将分装好的栽培种培养料移入高压锅内，温度升至121℃～126℃灭菌3.5h。 常压灭菌：100℃保持20h～30h。 3.9.6 冷却 按照本部分4.8.7规定执行。 3.9.7 接种 3.9.7.1 接种室（箱）或净化工作台的消毒 按照NY/T 528的规定，进行接种箱（室）