ICS 65.020.30 B 41 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 3677—2019 种猪场猪瘟净化技术规范 Technical Regulation of Eradication of Classical Swine Fever in Swine Breeding Farms 2019 - 08 - 30 发布 山东省市场监督管理局 2019 - 09 - 30 实施 发 布 DB37/T 3677—2019 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 检测方法 ........................................................................... 2 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 仪器 ........................................................................... 耗材 ........................................................................... 试剂 ........................................................................... 猪瘟病原检测 ................................................................... 猪瘟抗体检测 ................................................................... 2 2 2 2 3 5 净化群建立 ......................................................................... 3 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 净化策略 ....................................................................... 净化前的准备工作 ............................................................... 带毒情况摸底调查 ............................................................... 免疫 ........................................................................... 监测与淘汰阶段 ................................................................. 净化场的评估与认定 ............................................................. 3 3 3 4 4 5 6 净化猪群的维持 ..................................................................... 5 6.1 免疫 ........................................................................... 5 6.2 监测 ........................................................................... 5 7 综合生物安全措施 ................................................................... 6 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 合理的猪场选址 ................................................................. 生产模式 ....................................................................... 饲养管理 ....................................................................... 消毒措施 ....................................................................... 无害化处理措施 ................................................................. 有害生物防治 ................................................................... 档案管理 ....................................................................... 6 6 6 6 6 6 7 附 录 A （资料性附录） 猪瘟免疫无疫评估实验室检测方法及抽样要求 .................... 8 附 录 B （资料性附录） 猪瘟净化评估实验室检测方法及抽样要求 ........................ 9 I DB37/T 3677—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并监督实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省动物疫病预防与控制中心、山东省畜牧总站、山东汇众兽医科技服务公司。 本标准主要起草人：李云岗、张栋、张月、周开锋、汪洋、楚遵峰、王士荣、王敏、曹振山、刘波。 II DB37/T 3677—2019 种猪场猪瘟净化技术规范 1 范围 本标准规定了种猪场猪瘟净化的检测方法与判定标准、净化群的建立、净化群的维持和综合生物安 全措施。 本标准适用于种猪场猪瘟净化。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 17823 集约化猪场防疫基本要求 GB/T 17824.2 规模猪场生产技术规程 GB/T 16551 猪瘟诊断技术 GB/T 27540 猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法 GB/T 34729 猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测方法 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 NY/T 1568 标准化规模养猪场建设规范 NY/T 1958 猪瘟流行病学调查技术规范 DB37/T 2384 种猪场消毒技术规范 NY/T 1168 畜禽粪便无害化处理技术规范 《病死及病害动物无害化处理技术规范》 农医发〔2017〕25号 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 猪瘟 Classical Swine Fever，CSF 由黄病毒科瘟病毒属猪瘟病毒(CSFV)引起的一种猪的高度接触性、出血性和致死性传染病。 3.2 净化 eradication 在某一限定地区或养殖场内，根据特定疫病的流行病学调查结果和疫病监测结果，采取一系列措施， 及时发现并淘汰各种形式的感染动物，达到消灭和清除传染源的过程。 3.3 净化评估 eradication evaluation 1 DB37/T 3677—2019 各级动物疫病预防控制机构或其它具有公信力的第三方机构对依法开办的规模化养殖场是否符合 动物疫病净化条件所进行的审查、认证等活动。 4 检测方法 4.1 仪器 4.1.1 荧光 PCR 检测仪。 4.1.2 PCR 仪和凝胶成像系统（根据实验室条件选择，替换 4.1.1）。 4.1.3 高速台式冷冻离心机：可控温至 4 ℃、离心速度可达 12 000 r/min 以上。 4.1.4 组织研磨器或者研钵。 4.1.5 普通冰箱。 4.1.6 微量移液器：0.2 μL～2 μL，1 μL～10 μL，10 μL～100 μL，20 μL～200 μL，100 μ L～1 000 μL。 4.1.7 酶标仪。 4.1.8 恒温箱。 4.1.9 高压灭菌锅。 4.2 耗材 4.2.1 1.5 mL 离心管。 4.2.2 0.2 mL PCR 薄壁管。 4.2.3 酶标板，移液器吸头。 4.3 试剂 4.3.1 4.3.2 4.3.3 4.3.4 4.3.5 4.3.6 4.3.7 4.3.8 除非另有说明，在检测中使用的试剂均为分析纯，实验室用水应符合 GB/T 6682 的要求。 商品化 RNA 抽提试剂，于 4 ℃保存。 无水乙醇，-20 ℃预冷。 75 %乙醇，无水乙醇和双蒸水配制，-20 ℃预冷。 dNTPs：含 dATP、dGTP、dCTP、dTTP 各 10 mmol/L，-20 ℃保存，避免反复冻融。 普通 PCR 引物参照 GB/T 16551。 荧光 PCR 引物和探针参照 GB/T 27540。 酶标检测试剂 等效采用 GB/T 34729 商品化试剂盒。 4.4 猪瘟病原检测 4.4.1 采样准备 扁桃体采样器、灭菌0.5 mL离心管、灭菌棉签或牙签、3 % NaOH溶液、手电筒、记号笔、采样记录 表等。 4.4.2 样品类型 公猪精液；生产母猪、后备种猪扁桃体；非正常生产母猪流产胎儿的淋巴结、脾脏、脐带血；病死 猪扁桃体、脾脏、肾脏、淋巴结等。 4.4.3 采样要求 2 DB37/T 3677—2019 4.4.3.1 4.4.3.2 4.4.3.3