ICS 65.020.30 CCS B 41 团体 标准 T/SHZSAQS 00130—2022 绵羊活体冲胚操作 技术规程 2022-10 -05发布 2022-10-05实施 石河子市质量标准化协会 发布 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00130—2022 I 目 次 前言 ................................ ................................ ................ II 1 范围 ................................ ................................ .............. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........ 1 3.1供体羊 ................................ ................................ ............ 1 4 供体羊的选择与饲养管理 ................................ ............................ 1 4.1供体羊的选择 ................................ ................................ ...... 1 4.2供体羊的饲养管理 ................................ ................................ .. 2 5 供体羊的超数排卵及人工授精 ................................ ........................ 2 5.1超数排卵 ................................ ................................ .......... 2 5.2配种 ................................ ................................ .............. 3 6 羊手术冲胚及胚胎质量鉴定 ................................ .......................... 3 6.1手术冲胚 ................................ ................................ .......... 3 6.2胚胎发育期鉴定 ................................ ................................ .... 5 附录A（资料性附录） 绵羊活体冲胚药品、主要器械与设备 ................................ 7 附录B（资料性附录） FSH 3d 注射时间及剂量 ................................ .......... 9 附录C（规范性附录） 试剂配制 ................................ ....................... 10 附录D（资料性附录） 记录表 ................................ ......................... 11 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00130—2022 II 前 言 本文件参照 GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则 》给出的 规则起草。 本文件起草单位： 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所 。 本文件主要起草人 ：万鹏程、刘昱成、张振良、卢守亮、倪建宏、王晶晶、石国庆、刘长彬、 傅祥伟、郭延华、代蓉 。 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00130—2022 1 绵羊活体冲胚 操作技术规程 1 范围 本文件规定了绵羊活体 冲胚操作的术语与定义及供体羊的选择与饲养管理、供体羊的 超数排卵及人工授精、绵羊手术冲胚及胚胎质量鉴定等。适用于绵羊活体冲胚的操作。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日 期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包 括所有的修改单）适用于本文件 。 NY/T1571 羊胚胎移植技术规程 DB62/T1308 羊胚胎移植技术操作规程 DB65/T4074 绵羊体外胚胎生产技术操作过程 DB65/T4 497 绵羊腹腔镜定时输精技术操作规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本 文件。 3.1供体羊 指提供胚胎的母羊。 4 供体羊的选择与饲养管理 4.1供体羊的选择 4.1.1 品种优良、生产性能好、经济价值高。 4.1.2 遗传性能稳定、谱系清楚。 4.1.3 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00130—2022 2 体质健壮、繁殖机能正常、无遗传病、生殖疾病和传染性疾病。年龄在 1～5周岁。 4.1.4 产历清晰，性周期正常。 4.1.5 产羔90d以上，经观察至少有 2个以上正常发情周期的母羊。 供体羊的选择应符合 NY/T1571 相关要求 。 4.2 供体羊的饲养管理 4.2.1饲养环境 保持饲养环境温度稳定、适宜、卫生、干燥、避免应激反应。 4.2.2 饲喂方式 制定合理的供体羊日粮配方，保证营养平衡，充足清洁饮水，适当的运动。 5 供体羊的超数排卵及人工授精 5.1 超数排卵 5.1.1超数排卵的季节和发情周期 超数排卵最佳时间为每年的 9月上旬至 12月下旬。绵羊的发情周期在 15～17.5d。供体 母羊在超排前期需观察 2个完整的发情周期。 5.1.2 药品 FSH（促卵泡素）、 PG（前列腺素）、 LH（垂体促黄体生成素）、 CIDR（含孕激素阴道 栓塞）。 5.1.3 超数排卵方法 放入海绵栓或 CIDR（含孕激素阴道栓 ）之日，作为发情周期的第 0天，在第 9天开始注 射FSH，每日早、晚各注射 1针，中间间隔约 12h，连续3d，递减注射。注射第 5针FSH时，取 出CIDR，同步注射0.1mgPG。FSH、PG注射用量 见附录B。并符合DB65/T4074相关要求 。 5.1.4 供体羊发情鉴定 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00130—2022 3 在第6次注射FSH时，即对超排供体羊 进行发情观察。观察时间：早晚各 1次，每次不少 干0.5h。观察方法：试情公羊系好试情布，放入母羊群中试情，每 30～40只供体羊放 1只试 情公羊，以母羊站立接 受试情公羊爬跨作为发情的标准，并记录好发情的准确时间。 5.2 配种 5.2.1 种公羊的选择 选择谱系健全，检疫合格，遗传性能稳定，生产性能优良，精液品质良好的种公羊。 5.2.2 腹腔镜定时输精 腹腔镜定时输精使用器材、输精方法 应符合DB65/T4497 相关要求 。 图1 腹腔镜定时输精方法示意图 5.2.3 常规输精 a) 采精前对种公羊外生殖器清洗消毒。采精、精液稀释、输精用的器具严格灭菌、 消毒。 b) 母羊外阴部须 进行清洗消毒。 c) 稀释后的精液温度要保持在 25 ℃左右。 d) 用开膣器打开阴道找到子宫颈外口，将输精器插入子宫颈外口不少于 1cm，注入定 量精液。 5.2.4 配种的最适时间 确认供体母羊发情后，立即进行第一次输精，之后每隔 12h输精1次。鲜精液活力在 70% 以上，每次输精有效精子数不少于 3×107个，输精次数 3～4次。 6 羊手术冲胚及胚胎质量鉴定 6.1 手术冲胚 6.1.1冲胚主要器材 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00130—2022 4 手术台、剃毛刀、创布、止血纱布、剪毛剪、手术刀柄、手术剪、止血钳、巾帕钳、 持针器、肠钳（带乳胶管）、手术刀片、缝合针、镊 子、120mm表面皿、 180mm表面皿、 6～ 8#头皮针（尖端磨钝）、 18～20#针头（尖端磨钝）、 10mm透明硅胶管、 10ml注射器、 20ml 注射器、 8mm玻璃管和 35mm培养皿等。见附录 A。 6.1.2冲胚所需药品 75%酒精、碘酊、新洁尔灭、 0.9%生理盐水、青霉素、全麻药等。见附录 A。 6.1.3冲胚液的配置 杜氏磷酸盐缓冲液（ PBS）配方见附录 C。 6.1.4供体羊手术冲胚步骤 按附